Nouvelle méthode de criblage à haut débit pour l’analyse sans a priori d’anticorps monoclonaux thérapeutiques et de protéines de fusion pour le contrôle anti-dopage équin.

De nombreux produits biothérapeutiques innovants ont été commercialisés au cours de la dernière décennie. Les anticorps monoclonaux (AcM) et les protéines de fusion Fc (protéines Fc) ont été développés pour le traitement de diverses maladies (cancer, maladies auto-immunes et troubles inflammatoires) et représentent désormais une part importante des thérapies ciblées. Cependant, la disponibilité immédiate de ces biomolécules, parfois caractérisées par leurs propriétés anabolisantes, anti-inflammatoires ou stimulant l'érythropoïèse, soulève des inquiétudes quant à leur utilisation abusive potentielle en tant qu'améliorateurs de performance pour les athlètes humains et animaux. A ce jour, une seule méthode a été rapportée pour détecter l'administration d'une protéine de fusion humaine spécifique dans le plasma équin. Cependant, aucune méthode à haut débit n'a été décrite pour le dépistage sans a priori de macromolécules biothérapeutiques dans les matrices équines.

Dans ce contexte, une nouvelle méthode de criblage à large spectre impliquant l'UHPLC-HRMS/MS a été développée pour l'analyse des AcM thérapeutiques et des protéines de fusion dans le plasma équin. Cette approche de protéomique ciblée est réalisée dans une plaque à 96 puits et démontre des performances fiables à de faibles concentrations (de l'ordre de pmol/mL) à haut débit (≈100 échantillons/jour). Le ciblage de peptides protéotypiques spécifiques, situés dans les parties constantes des AcM, permet la détection "universelle" de produits biothérapeutiques constitués de séquences protéiques d’IgG humaines et murines, en contrôlant seulement 10 peptides. Comme preuve de principe, cette stratégie a permis de détecter avec succès plusieurs AcM et protéines de fusion dans des échantillons de plasma supplémentés et a permis, pour la première fois, de détecter un AcM humain jusqu'à 10 jours après une administration unique de 0,12 mg/kg à un cheval. Ce développement permettra d'étendre les capacités analytiques des laboratoires de lutte contre le dopage des chevaux aux macromolécules biothérapeutiques composées d’immunoglobulines, en utilisant une méthode à haut débit, sensible, spécifique et robuste possédant un rapport efficacité/coûts élevé.

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• Patrice Garcia